专家文章

脑缺血再灌注后水通道蛋白4动态变化的研究

孙基栋
孙基栋

副主任医师 神经外科

航空总医院

三级
极速问诊

脑水肿与缺血性脑血管疾病的致残率、病死率有很大关系。水通道蛋白(AQPs) 可能在脑组织水转运过程中起关键作用,与脑水肿的发生密切相关[1]。本研究采用大鼠缺血再灌注模型,研究不同的缺血时间与再灌注时间影响下AQP4的表达变化及其可能的意义。清华大学玉泉医院神经外科孙基栋

材料和方法

一、大鼠分组

健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠91只,体重230±20 g。随机分为假手术组(7只)和脑缺血再灌注组(84只);脑缺血再灌注组又分为脑缺血2h、3h、6h后再灌12h、24h、3d、7d,共12个亚组(每组7只)。

二、缺血再灌注模型制备

采用改良的Longa线栓法建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型。10 %水合氯醛(400mg/ kg) 溶液腹腔注射,麻醉大鼠。颈部正中纵向切口,充分暴露左侧颈总动脉,分离颈外动脉及颈内动脉,在颈外动脉根部结扎颈外动脉;近心端结扎左侧颈总动脉,动脉夹夹闭颈总动脉远端,在结扎线和动脉夹之间的颈总动脉上剪一小切口,切口远端打一松扣,将一头端烧成球形的直径0.165mm的尼龙线插入切口,缚紧切口远端之丝线,松开动脉夹,将钓鱼线缓慢向颈内动脉入颅的方向推进,至有阻力不能再进为止。将尼龙线尾端留在皮外,再灌注时拔出插线。假手术组除不进线外,全过程同缺血组。按照 Longa的5分法进行神经病学评分: 0 分,无神经缺损症状,活动正常;1 分,右前肢不能完全伸直;2 分,侧推抵抗力减弱,向右旋转;3 分,向右侧倾倒;4 分,不能自发行走,意识丧失。其中,0分和4分者被剔除,随机补充,保持每组7只不变。

三、脑组织处理及免疫组化

将各组大鼠于各相应时间点以10%水合氯醛腹腔注射深度麻醉,打开胸腔充分暴露心脏,经右心室插管至主动脉,固定插管并剪开右心耳,先用100ml 0.9%温生理盐水经插管冲洗血管内血液,至右心耳流出的液体澄清后,再灌注4%的多聚甲醛200ml,断头取脑,固定、脱水、石蜡包埋,常规HE染色及免疫组化检测。小鼠抗大鼠AQP4单克隆抗体AQP4(浓度1∶100)购于Santacruz公司。实验过程严格按照试剂盒说明进行。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

四、统计学处理

大鼠AQP4免疫组化图像分析: 光镜下对每张切片于梗死灶周边半暗带选择10个高倍视野,用计算机图像分析处理软件Motic images advanced 3.0检测受检区AQP4显色的面积比(即阳性区面积与总面积的比例)。

采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。数据均以 表示。采用析因设计的方差分析,P < 0.05表示有统计学意义。

结 果

一、HE染色结果

假手术组,未见神经元病理组织学改变。缺血再灌注组:梗死灶主要位于大鼠左侧大脑顶叶、颞叶及基底节区,呈典型的液化性坏死改变。随着缺血时间的延长神经毡溶解增加,组织疏松淡染,大量神经元坏死消失,残存神经元胞体缩小,胞核固缩呈三角形,核仁消失。

二、免疫组化染色结果

AQP4 在假手术组鼠脑主要在脑实质内血管周围星形胶质细胞 (图1),侧脑室及第三脑室室管膜细胞、脉络从上皮细胞(图2)呈阳性表达,未见神经元着色。缺血组梗死灶中心无表达,而在梗死灶周围高表达,主要表达于血管周围星形胶质细胞,部分神经元也可见阳性表达(图3)。

三、统计学分析结果

缺血再灌注各组脑内AQP4表达较假手术组均明显升高。在缺血与再灌注双重因素影响下,AQP4蛋白表达与缺血时间、再灌注时间均有相关性(表1-2,图4,p值分别为p


此文章内容仅代表医生观点,仅供参考。涉及用药、治疗等问题请到当地医院就诊,谨遵医嘱!

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