胶质瘤是人脑最常见的恶性肿瘤。在肿瘤生长和恶性进展过程中，多伴有新生血管生成和瘤周脑水肿形成,其分子生物学机制还未完全阐明，多种细胞因子可能与这些过程有关。血管生成素(angiopoietin，Ang)是一种新的内皮生长因子家族，与其特异性酪氨酸激酶受体Tie2结合，在血管生成及血管稳定性方面起重要作用。最近研究认为，Ang参与肿瘤生长和肿瘤血管生成。其中Ang-2是肿瘤血管新生起始及加强的重要因素，与肿瘤血管形成密切相关[1,2]。本研究采用RT-PCR、免疫组化方法分别测定人脑胶质瘤组织Ang-2 mRNA、Ang-2蛋白表达情况，并探讨其与肿瘤血管生成及瘤周脑水肿的关系。

材料和方法

1.组织标本：所有标本均选自2001年～2002年手术切除的新鲜标本。胶质瘤标本42例，内减压切除的正常脑组织标本8例，其中男性29例，女性21例。年龄14岁～76岁，平均年龄39.06岁。一部分标本用液氮速冻，-70℃低温冰箱保存;另一部分用福尔马林固定，常规病理组织学检测和免疫组化染色。

2.半定量RT-PCR检测组织Ang-2 mRNA表达: 按Trizol试剂盒说明提取组织总RNA。RT-PCR方法检测Ang-2 mRNA表达。上游引物Ang-2-L: 5’-ggatctggggagagaggaac-3’，下游引物Ang-2-R: 5’-ctctgcaccgagtcatcgta-3’，片段长度535bp;扩增内参GAPDH的引物为：上游引物GAPDH-L:5’-ctcagacaccatggggaaggtga-3’,下游引物GAPDH-R: 5’-atgatcttgaggcagttgtcata-3’，片段长度450bp。PCR扩增条件为：(1)94oC 5min，(2)94oC 1min，62oC 1min，72oC 1min，，(3)72oC 10min。扩增Ang-2时重复步骤(2)25个循环，扩增GAPDH时重复步骤(2)35个循环。阴性对照反应体系中不加cDNA模板。PCR产物经含EB的2%琼脂糖凝胶电泳分离后，拍照, 采用复日SmartView 2001生物电泳图像分析系统进行半定量分析。用Ang-2与GAPDH条带的光密度比值作为Ang-2 mRNA的表达值。

3.免疫组化染色：山羊抗人Ang-2多克隆抗体为Santa Cruz公司产品;小鼠抗人CD34单克隆抗体、免疫组化检测试剂盒EnVision

System Kit(HRP)为Dako公司生产。4μm厚石蜡切片经脱蜡水化后，微波抗原修复，常规HRP标记后用DAB显色，Mayer氏苏木素复染。每组均用已知阳性片作对照。用PBS代替一抗作阴性对照。免疫组化染色胞浆呈棕黄色为阳性信号。

4.微血管计数(MVD)：每一张组织切片选择血管最丰富的5个区域，200倍光镜下计数CD34单克隆抗体标记血管数，取平均值即为该肿瘤组织的MVD(个/㎜2)。

5.瘤周水肿测定：参照Inamura[3]等估计瘤周脑水肿的方法，所有被选择病人术前常规行MRI检查，测量T1加权像层面肿瘤最大直径和与其垂直的径线长度以及冠状位或矢状位瘤体的最大高度，三者乘积即为瘤体体积。同样方法测算出T2加权像水肿(包括瘤体)体积，则水肿指数(EI)=水肿体积/瘤体体积。

6.统计学方法：所有数据应用SPSS10.0软件进行统计学分析。采用t检验、one-way ANOVA检验、Spearman相关分析、Pearson直线相关分析。P

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