目的探讨血红素氧合酶1重组腺病毒载体(Ad-HO-1)体外转染人肝细胞的转染效果及其对肝细胞缺氧-复氧损伤的影响。

方法取人肝细胞系L-02 细胞，滴加低温保存的Ad-HO-1，分别培养24h、48h和72h(24h组、48h组和72h组)，并以加入空载体腺病毒共培养的L-02细胞为空白对照。采用逆转录聚合酶链反应法检测各组肝细胞HO-1 mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法检测各组肝细胞的HO-1表达率;在倒置荧光显微镜下观察转染24h和72h的肝细胞中绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。取空白对照组肝细胞(培养48h)和48h组肝细胞，缺氧培养4h后再有氧培养8h，采用四甲基偶氮唑盐法测定两组肝细胞存活率。结果24h组、48h组和72h组HO-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组，且随着转染时间的延长，HO-1 mRNA的表达水平逐渐升高。空白对照组HO-1的表达率为2.0%，24h组为29%，48h组为85.6%，72h组为84.6%。基因转染后24h 和72h，可以观察到L-02细胞中EGFP的表达。经历缺氧-复氧实验后，空白对照组肝细胞的存活率为(37.7±3.5)%，48h组肝细胞的存活率为(89.4±5.2)%，二者相比较，差异有统计学意义(P〈0.01)。

结论Ad-HO-1在体外能有效的转染人肝细胞;与未转染者相比，转染肝细胞的缺氧-复氧损伤程度较轻。

《中华器官移植杂志》 2009年第30卷第1期

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